時間：2022-05-27 07:46:04
開篇：寫作不僅是一種記錄，更是一種創(chuàng)造，它讓我們能夠捕捉那些稍縱即逝的靈感，將它們永久地定格在紙上。下面是小編精心整理的12篇血細(xì)胞分析儀，希望這些內(nèi)容能成為您創(chuàng)作過程中的良師益友，陪伴您不斷探索和進步。
血細(xì)胞分析儀具有快速、方便、重復(fù)性好、工作效率高等特點。目前各大、中醫(yī)院檢驗科已廣泛應(yīng)用。但血細(xì)胞分析儀測定血小板計數(shù)，常會出現(xiàn)結(jié)果誤差，這是臨床經(jīng)常遇到的問題。為此，本文主要對血細(xì)胞分析儀計數(shù)血小板的影響因素進行分析，旨在為臨床提供可靠的診斷依據(jù)。
1 材料與方法
1.1 儀器:采用的儀器是日本Sysmex公司生產(chǎn)的KX-21型全自動血細(xì)胞分析儀。
1.2 試劑 ① 儀器用的稀釋液、清洗液、溶血劑均由日本Sysmex公司提供。② 顯微鏡計數(shù)用的血小板稀釋液按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》（第二版）配制，冰箱保存。 ③EDTA-K2抗凝劑
1.3 標(biāo)本來源 選自2008年1月-2008年12月本院門診及住院的血小板結(jié)果異常的血標(biāo)本共207例，另挑選血小板結(jié)果正常的血100作對照。
1.4 用EDTA-K2抗凝全血2ml，充分混勻后，2小時內(nèi)KX-21型全自動血細(xì)胞分析儀檢測，取血小板檢測結(jié)果異常的血標(biāo)本，同時用顯微鏡手工計數(shù)，另取血小板檢測結(jié)果正常的血標(biāo)本100例同時用顯微鏡手工計數(shù)，比較兩法結(jié)果。
2 結(jié)果
血小板少于100×109／L的血標(biāo)本121例，為A組；血小板大于300×109／L的血標(biāo)本86例，為B組；lind板在100~300×109／L的血標(biāo)本100例，為C組，其兩法測定結(jié)果如表1所示。
3 討論
3.1 在Sysmex X-21型全自動血細(xì)胞分析儀檢測中，由于紅細(xì)胞和血小板的計數(shù)是在同一通道中進行，且它們之間僅以體積大小來區(qū)別，因此，血小板的計數(shù)易受小紅細(xì)胞數(shù)量或紅細(xì)胞碎片的影響，由于血液中小紅細(xì)胞的數(shù)量遠大于血小板數(shù)量，即使有少量的小紅細(xì)胞混入血小板計數(shù)范圍內(nèi)，也會對血小板計數(shù)造成很大的影響。在血小板直方圖右側(cè)下降后繼而抬高呈駝峰樣改變，血片油鏡檢查顯示紅細(xì)胞較小或紅細(xì)胞碎片較多，兩種方法血小板計數(shù)結(jié)果比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）.
3.2 由于血小板的特點易于粘附、聚集。李永紅等認(rèn)為采血是否順利是造成血小板偏低的的一個重要原因。采血過程中因操作緩慢，穿刺不順且組織受損后，組織凝血因子易混入血標(biāo)本，混勻不及時等均可促成血小板聚集，從而產(chǎn)生肉眼看不見的小凝塊，這是血細(xì)胞分析儀測定血小板結(jié)果偏低的常見原因之一。這時血片鏡檢可見血小板聚集成堆。遇到這種情況應(yīng)重新采血測定。
3.3 某些血液病可造成血小板數(shù)真正減少，如骨髓巨核細(xì)胞生成不良（如障）；血小板破壞增加（如DIC、IPT）;血小板分布異常（如脾大）等。
3.4 標(biāo)本放置時間過長、試劑質(zhì)量、地線、電源和藥物等因素均能對血小板的計數(shù)造成一定程度的影響，因此檢測過程中應(yīng)盡可能排除各種因素的干擾，以使血小板計數(shù)可靠，為臨床診斷治療提供有參考意義的數(shù)據(jù)。
參考文獻
［1］ 趙紅燕.血液細(xì)胞儀測定血小板計數(shù)結(jié)果的分析.上海醫(yī)學(xué)檢驗雜志，1998.1.3（2）：27
［2］ 陳夢珍。血細(xì)胞分析儀測定血小板影響因素的探討。江西醫(yī)學(xué)學(xué)報，2005,23（3）:243-244
［3］ 詹靈凌，秦雪、林發(fā)全等。血細(xì)胞分析儀計數(shù)血小板的影響因素分析與糾正，廣西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2004.21（5）:763-764。
［4］ 李永紅、鐘步云。血細(xì)胞分析儀測定血小板結(jié)果偏低的原因及糾正方法。臨床檢驗雜志，2001.192:112.
血小板假性減低的因素
采血不順利：此種情況多發(fā)生在老人，兒童及體質(zhì)較差的的患者身上，因采血不順引起組織損傷，凝血因子混入血標(biāo)本造成血小板集聚［1］，產(chǎn)生微小的目測不到的凝塊。這是引起血小板假性減低最常見的原因。這些標(biāo)本涂片鏡檢時可見大量的血小板凝聚成團。
標(biāo)本放置時間：用EDTAK2作為抗凝劑已被國際血液學(xué)標(biāo)本委員會認(rèn)定并廣泛應(yīng)用。EDTAK2會使血小板形態(tài)發(fā)生變化，其外膜形成微小管。游離端向外伸展形成偽足，這些偽足纏繞在一起形成血小板可逆聚集體若在。此時測定血小板會假性減低，直方圖呈鋸齒狀異常。但隨著時間延長可逆性聚集體會破壞［2］。因此采取室溫放置30分鐘可以避免這種情況的血小板假性減少［3］。
血小板EDTA依賴性聚集：一些患者血標(biāo)本與EDTA抗凝劑混合后其血小板會發(fā)生EDTA依賴性聚集，有報道認(rèn)為血小板EDTA依賴性聚集與血小板表面抗原（IGA、TGG、IGM）的自身抗體以及患者血清中抗心磷脂抗體有關(guān)由于全細(xì)胞分析儀對凝集體的結(jié)構(gòu)不能識別，一些血小板未被計數(shù)導(dǎo)致血小板假性減低［4］，這種凝集可見血小板直方圖異常，涂片鏡檢可見大量血小板凝集成團。
巨大血小板導(dǎo)致血小板計數(shù)假性降低：病人由于某些疾病血小板體積較大，超出了血細(xì)胞分析儀測定血小板的閾值，使血小板計數(shù)假性降低。在此種情況可見血小板直方圖底部分布較寬，MPV值較高。血涂片瑞氏染色后可見血小板體積較大。
血小板衛(wèi)星現(xiàn)象：血小板衛(wèi)星現(xiàn)象是指EDTA抗凝血中血小板黏附于白細(xì)胞周圍，這是由于白細(xì)胞表面的IGG或FC片斷與血小板表面的GPⅡB/ⅢA結(jié)合所致。由于一些血小板黏附于白細(xì)胞上，細(xì)胞分析儀計數(shù)血小板時未被計入導(dǎo)致血小板假性減少［5］。通過血涂片鏡檢可見大量血小板圍繞在多形核白細(xì)胞的周圍，形狀很象衛(wèi)星。這種情況較少見，有報道稱加入枸櫞酸鹽可消除此現(xiàn)象。
血小板假性增高
溶血：標(biāo)本溶血后紅細(xì)胞和白細(xì)胞受到破壞，破碎的紅白細(xì)胞碎片體積和血小板相近，都可被細(xì)胞分析儀誤計為血小板，使血小板計數(shù)假性增高。
小紅細(xì)胞：如果紅細(xì)胞體積過小，接近血小板體積的測定范圍，由于儀器只識別顆粒大小，不識別顆粒性質(zhì)，誤將小紅細(xì)胞計成血小板，導(dǎo)致血小板假性升高，此種情況可見血小板直方圖尾部異常，涂片鏡檢可見紅細(xì)胞體積較小。
總之，造成血小板誤差的原因很多。這要求在實際工作中不僅要嚴(yán)格按照操作規(guī)程操作，還要仔細(xì)審核結(jié)果，如果發(fā)現(xiàn)血小板數(shù)目過高或過低、直方圖分布異常、計數(shù)與臨床不符時都應(yīng)涂片鏡檢并重新計數(shù)。
參考文獻
1 李永紅,鐘步云.血液分析儀測定血小板結(jié)果偏低的原因及糾正方法［J］.臨床檢驗雜志,2001,19（2）:112.
2 叢玉隆.當(dāng)代血液分析儀與臨床［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社,1997:34.
3 李勝發(fā),程大林.血小板可逆性聚集在全血細(xì)胞分析儀中的影響［J］.臨床檢驗雜志,2003,21（1）:37.
【關(guān)鍵詞】血細(xì)胞分析儀；性能；評價
前言
血細(xì)胞分析儀具有快速、方便、工作效率高等優(yōu)點，已經(jīng)廣泛應(yīng)用于各大、中醫(yī)院檢驗科。隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，血細(xì)胞分析儀日益完善，為臨床提供了血細(xì)胞直方圖等普通手段難以測量的參數(shù)，使血細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察不再只局限于顯微鏡下少數(shù)細(xì)胞的微觀結(jié)構(gòu)。由美國貝克曼-庫爾特公司生產(chǎn)的五分類HMX型血細(xì)胞分析儀采用VCS（電導(dǎo)、射頻、激光）技術(shù)，對接近原態(tài)細(xì)胞的體積、核質(zhì)比、顆粒特性進行精確的測定和分析，其結(jié)果于三維空間內(nèi)將細(xì)胞區(qū)分為五個亞型，達到白細(xì)胞五分類的目的。當(dāng)標(biāo)本中存在異常細(xì)胞時，根據(jù)儀器內(nèi)定和人工設(shè)定的參數(shù)閾值，對可疑異常細(xì)胞作出報警提示。此外，Coulter HMX型血細(xì)胞分析儀增加了網(wǎng)織紅細(xì)胞有關(guān)參數(shù)的測定，為臨床診斷及患者預(yù)后觀察提供了更多參考價值。為了探討該分析儀的精密度、準(zhǔn)確度及攜帶污染率，對白細(xì)胞五分類結(jié)果及異常細(xì)胞報警提示的可信性，鏡檢與儀器檢測兩種方法同時進行網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)的相關(guān)性，我們通過復(fù)片觀察，比較兩者的符合率，以對該儀器性能作以評價。
1材料
1.1儀器：Beckman Coulter HMX血細(xì)胞分析儀（美國貝克曼-庫爾特公司），雙目顯微鏡（Olympus公司）
1.2試劑：由美國庫爾特公司生產(chǎn)的與HMX型血細(xì)胞分析儀配套使用的試劑。溶血劑 批號：101607F ；稀釋液 批號：C303005；清洗劑 批號：C211001B；網(wǎng)織紅細(xì)胞試劑 批號：109162;高、中、低三種定值全血質(zhì)控物 批號：885000 ；1%煌焦油藍試劑 按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第二版配制
1.3標(biāo)本來源：門診及本院住院患者
2統(tǒng)計學(xué)處理
采用SPSS For Window 11.0統(tǒng)計軟件進行方差分析
3方法與結(jié)果
3.1精密度與準(zhǔn)確度的測定：以高、中、低三種已知定值的全血質(zhì)控物連續(xù)測定10次，計算出其中四項的均值（X）、標(biāo)準(zhǔn)差（S）、變異系數(shù)（CV）。評價精密度選用CV值，其結(jié)果見表1，質(zhì)控物實驗組測定值與靶值比較評價儀器的準(zhǔn)確度，選用方差分析,各項P>0.0 5，說明實驗組的測定值與靶值無明顯差別，即儀器的準(zhǔn)確度較好。
表1 三種已知定值質(zhì)控物測定值
3.2攜帶污染率檢測:先連續(xù)測定高值樣品3次(H1、H2、H3),緊接著再連續(xù)測定低值樣品3次(L1、L2、L3),通過公式攜帶污染率=L1-L3/H3-L3*100%計算結(jié)果,WBC、RBC、HB、PLT各項攜帶污染率在0～1.13%之間。
3.3網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)儀器法與鏡檢法比較：選取30例樣品，將全血與網(wǎng)織紅細(xì)胞試劑混勻溫育5分鐘，每份樣品用儀器測定的同時采用手工法完成計數(shù)。每份標(biāo)本均測2次，取平均值，由本科2名富有經(jīng)驗的中級職稱以上人員進行。為判斷方法間有無顯著性差異，即主要是評價儀器的性能，因此不考慮會產(chǎn)生影響的人與人之間的顯著性差異，進行方法學(xué)之間的單因素方差分析。由分析得出P>0.05,說明兩方法之間不存在顯著性差異，這表明機器法與手工法進行網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)結(jié)果差別不明顯，說明機器性能良好，可信度較高。
3.4白細(xì)胞分類儀器法與手工法相關(guān)性分析：隨機選取30份樣品進行儀器測定的同時，將各樣品制備血涂片，瑞氏染色鏡檢200個白細(xì)胞分類（鑒于嗜堿性粒細(xì)胞少見，這里不作以分析比較）。由本科2位富有經(jīng)驗中級職稱以上的老檢驗人員完成。通過兩者的測定值比較二者的相關(guān)性。為斷定方法之間有無顯著性差異，即是主要要評價機器的性能，故不考慮會產(chǎn)生影響的人與人之間的顯著性差異，只做方法之間的單因素方差分析。經(jīng)統(tǒng)計分析得到各項中P>0.05,說明兩方法不存在顯著性差異，即儀器法與手工法顯著性差異不明顯，說明儀器法同手工法的符合率很好。
3.5儀器對形態(tài)異常細(xì)胞提示功能的評價：另選取門診及本院住院患者標(biāo)本30例，上機檢測的同時各涂血片，瑞氏染色，鏡下計數(shù)200個白細(xì)胞。儀器的操作嚴(yán)格按照操作手冊完成。(1)Imm NE;(2)NRBC/Platelet Clumps;(3)Blast/Variant LY三項中儀器顯示的任何一項提示為陽性。顯微鏡分類符合下列標(biāo)準(zhǔn)之一即判定為陽性：(1)中性桿狀核粒細(xì)胞＞15%；(2)不典型淋巴細(xì)胞＞10%；(3)晚幼粒或更早階段粒細(xì)胞＞1%；(4)幼紅細(xì)胞占白細(xì)胞數(shù)1%以上[1]。以鏡檢結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，儀器及鏡檢均為陽性，定義為真陽性（14例）；儀器陽性而鏡檢陰性的定義為假陽性（4例）；二者均為陰性的定義為真陰性（12例）；儀器陰性而鏡檢陽性的定義為假陰性（0例）。據(jù)此得出本組病例中儀器對形態(tài)異常血細(xì)胞得提示功能特異性為75.0%；敏感性為100%；檢出有效率為86.7%；假陽性占13.3%；假陰性占0%。
3種異常結(jié)果提示及儀器與鏡檢陽性符合率分析。見表2
表2 儀器提示3種異常結(jié)果與顯微鏡目測比較
4討論
由美國貝克曼-庫爾特公司生產(chǎn)的Beckman Coulter HMX型血細(xì)胞分析儀采用了VCS三維技術(shù)對全血細(xì)胞進行分析。其優(yōu)點是不但可以對白細(xì)胞進行五分類，而且可以進行網(wǎng)織紅細(xì)胞計數(shù)，適合大批量標(biāo)本的篩查檢測。不但為臨床提供了更多的診斷及治療信息，而且為檢驗科在繁重的工作中節(jié)省時間、人力，提高了效率。該設(shè)備在開機時可自動測知本底，以便了解儀器中各試劑的使用情況。使用中操作簡單，可連續(xù)測定，速度快。儀器連有顯示屏，各系統(tǒng)操作均在屏幕上完成，實現(xiàn)了人機對話，以利于掌握測量分析中的各種信息。另外，屏幕上在顯示各項測定值的同時配有三維直方圖及報警提示，使操作人員更直觀地了解該標(biāo)本的基本情況，達到對該批標(biāo)本進行初篩的作用。
[關(guān)鍵詞] 血細(xì)胞分析儀；自動全血模式；預(yù)稀釋模式
[中圖分類號] R446.1 [文獻標(biāo)識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）06-0074-03
眾所周知，隨著當(dāng)前醫(yī)療衛(wèi)生事業(yè)的不斷發(fā)展，醫(yī)療診療設(shè)備不斷進入醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)。檢驗設(shè)備更是日新月異，尤其是大型全自動檢驗設(shè)備的投入，更大大提高了工作效率，節(jié)省了患者就診時間，降低了勞動強度，節(jié)省了人力資源；同時也降低了人為誤差，提高了準(zhǔn)確度。全自動血細(xì)胞分析儀作為醫(yī)院患者的三大常規(guī)檢測項目之一的檢測設(shè)備，更是在醫(yī)院得到廣泛應(yīng)用[1]。自動全血模式和預(yù)稀釋模式是全自動血細(xì)胞分析儀常用的兩種檢測模式，為了了解兩種模式在邁瑞B(yǎng)C-5600全自動血細(xì)胞分析儀上的檢測性能，2013年10月我們將血細(xì)胞分析儀專用質(zhì)控物（光學(xué)法）用這兩種檢測模式各進行30次檢測，現(xiàn)報道如下。
1 儀器、材料與方法
1.1 儀器及試劑
邁瑞B(yǎng)C-5600全自動血細(xì)胞分析儀，中國深圳邁瑞公司產(chǎn)品，該儀器具有自動全血和預(yù)稀釋模式，全部使用原裝配套的稀釋液、溶血劑、清洗液、校準(zhǔn)品和質(zhì)控品。
1.2 材料
1.2.1 血細(xì)胞分析儀用質(zhì)控物（光學(xué)法）水平中值 3.0mL；型號：BC-SD；P/N：040-00/426-00.LOT.BC309AN.2013-11-05；深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司MINDRAY，BC.5600。
1.2.2 自動全血模式樣本 血細(xì)胞分析儀用質(zhì)控物（光學(xué)法）水平中值：從冰箱取出，恢復(fù)室溫，混勻后上機自動檢測。
1.2.3 預(yù)稀釋模式樣本 40 μL的血細(xì)胞分析儀用質(zhì)控物和120 μL的稀釋液混合均勻，即配成預(yù)稀釋模式樣本。
1.3 方法
1.3.1 檢測方法 按儀器操作說明[2]，調(diào)整校對好BC-5600全自動血細(xì)胞分析儀，在這兩種檢測模式下對兩種模式樣本各進行30次檢測。
1.3.2 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件對兩種模式實驗數(shù)據(jù)[白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）、血細(xì)胞比容（HCT）、血小板（PLT）的結(jié)果]進行處理，結(jié)果用均值±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，采用t檢驗，P < 0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
2 結(jié)果
邁瑞B(yǎng)C-SD血液細(xì)胞質(zhì)控物在BC-5600全自動血細(xì)胞分析儀的兩種模式各30次的檢測結(jié)果見表1。對比兩種檢測模式的結(jié)果不難看出自動全血模式下的各項目精密度優(yōu)于預(yù)稀釋模式。兩種模式白細(xì)胞（WBC）、紅細(xì)胞（RBC）、血紅蛋白（HGB）、血細(xì)胞比容（HCT）差異極為顯著，而血小板（PLT）的結(jié)果無差異。
3 討論
血細(xì)胞檢測作為醫(yī)院就診者的常規(guī)檢測項目，對就診人員是否存在出血、炎癥、感染、貧血和血液系統(tǒng)疾病等提供重要診療信息[3-7]。尤其對那些以傳染病、肝膽病患者為主的專科性醫(yī)療機構(gòu)，血細(xì)胞檢測在細(xì)菌/病毒感染、脾功能亢進、消化道出血患者的診療以及抗病毒藥物治療過程中更加重要[8-10]。
血細(xì)胞分析儀自從20世紀(jì)50年代，庫爾特（Coulter WH）根據(jù)血細(xì)胞是不良導(dǎo)體的特性，在電解質(zhì)溶液中懸浮細(xì)胞顆粒在通過計數(shù)小孔時引起電阻變化，再經(jīng)儀器放大、甄別、整形、計數(shù)，生產(chǎn)出第一臺血細(xì)胞計數(shù)儀后，開創(chuàng)了血細(xì)胞計數(shù)的新篇章，實現(xiàn)了血細(xì)胞計數(shù)的自動化。目前，隨著科技的不斷發(fā)展，血細(xì)胞計數(shù)儀在庫爾特原理基礎(chǔ)上有了新的飛躍。血細(xì)胞計數(shù)儀也由半自動到全自動，三分類發(fā)展到五分類；儀器的設(shè)計更加精密、嚴(yán)謹(jǐn)，功能更加完善，分析方法也不斷更新?lián)Q代。全自動血細(xì)胞分析儀BC-5600應(yīng)用半導(dǎo)體激光流式細(xì)胞技術(shù)獲得白細(xì)胞總數(shù)和五類白細(xì)胞的分類統(tǒng)計計數(shù)；血紅蛋白濃度采用比色法；紅細(xì)胞和血小板數(shù)目以及體積分布用電阻抗法檢測；其余參數(shù)由分析儀計算得出。
由表1不難看出，自動全血模式結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)較預(yù)稀釋模式的小，其結(jié)果的精準(zhǔn)度也就更可靠[11]。自動全血模式的重復(fù)性、精密度之所以較預(yù)稀釋模式的好，是由于自動全血模式的檢測全程基本都在封閉的環(huán)境中進行，既沒有人工操作的參與，也不受外界環(huán)境影響，更沒有交叉污染的干擾；再加現(xiàn)代儀器的做工精良、考究、嚴(yán)謹(jǐn)，使得儀器在檢測過程中的吸樣和稀釋兩步固有誤差降低，并可通過質(zhì)控品和校準(zhǔn)品進行校正和修正。而預(yù)稀釋模式下，從預(yù)稀釋液的準(zhǔn)備及末梢血樣本的采集、吸取、混勻到放置后混勻上機檢測，整個過程都在外環(huán)境中暴露，是開放性的；此過程中，稀釋液采集的精準(zhǔn)、人工末梢血采集時的污染、采血微量管的偏差、吸取末梢血及混勻操作的差異、還有試劑水分蒸發(fā)和空氣中顆粒污染等隨機誤差很難消除，因而對檢測結(jié)果造成偏差，影響準(zhǔn)確性。
從本文可知外周血誤差大、重復(fù)性差，因此做血細(xì)胞分析時盡量按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》要求采用抗凝靜脈血，而少用外周末梢血。并按國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會的要求用乙二胺四乙酸二鉀（EDTA-K2）抗凝，且含量為每毫升血液用1.5～2.2 mg抗凝劑[4]。要嚴(yán)格控制血液與抗凝劑的比例，不能過高或過低，否則影響血細(xì)胞計數(shù)的準(zhǔn)確性。對于極個別因使用EDTA-K2抗凝造成血小板偏低者，可換成枸櫞酸鹽或在EDTA-K2抗凝血中加入肝磷脂[12]。另外，使用抗凝靜脈血不僅防止了交叉污染，延長了儀器壽命，還能滿足原標(biāo)本的復(fù)檢和正確反映患者外周血的實際情況。但BC-5600預(yù)稀釋模式的稀釋樣品僅可以計數(shù)1次，對超出儀器檢測能力或異常的樣本仍需要再次采集血液，增加患者的痛苦。
為了確保結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，在使用血液細(xì)胞分析儀時應(yīng)注意如下幾點：①工作人員上機前要熟讀儀器和試劑說明書，掌握原理并嚴(yán)格按程序操作，并使用原廠配套試劑[4，13]。②用EDTA-K2真空采血管采集靜脈血，并立即顛倒混勻；抗凝血采集后在室溫中不應(yīng)超過6 h；如需制作血涂片應(yīng)在2 h內(nèi)完成。③檢測前必須將樣本充分混勻。④標(biāo)本上機前應(yīng)仔細(xì)檢查標(biāo)本量和有無凝塊[6]。⑤對于血細(xì)胞分析儀結(jié)果異常樣本應(yīng)推片染色顯微鏡下鏡檢，當(dāng)然，對于嬰幼兒等特殊患者，可采用末梢血檢測，而檢測結(jié)果需校正后方可發(fā)出報告。
總之，自動全血模式檢測具有良好的重復(fù)性、準(zhǔn)確性，優(yōu)于預(yù)稀釋模式，建議推廣，各級醫(yī)療單位可根據(jù)實際情況合理選擇。
[參考文獻]
[1] 孫黎明. 三分類血液分析儀測量原理及實現(xiàn)過程技術(shù)要點分析[J]. 醫(yī)療裝備，2007，20（3）：13-16.
[2] 中國深圳邁瑞公司. BC-5600操作說明書[S]. 2000.
[3] 賈麗霞. 血細(xì)胞分析儀的質(zhì)量控制[J]. 實用醫(yī)技雜志，2013， 20（9）：1012-1013.
[4] 葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜. 全國臨床檢驗操作規(guī)程[M]. 南京：東南大學(xué)出版社，2006：125-143.
[5] 葛均波，徐永健. 內(nèi)科學(xué)[M]. 第8版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：539-542.
[6] 余永強. 現(xiàn)代醫(yī)院診療常規(guī).醫(yī)技分冊[M]. 合肥：安徽科學(xué)技術(shù)出版社，2012：3-8.
[7] 符忠剛. 血細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察與分析儀對血液系統(tǒng)疾病診斷的臨床價值比較[J]. 中國醫(yī)藥指南，2012，10（8）：181-182.
[8] 中華人民共和國衛(wèi)生部. 手足口病診療指南（2010年版）[J]. 國際呼吸雜志，2010，30（24）：1473-1475.
[9] 田艷俠. 血細(xì)胞分析儀測定紅細(xì)胞與血小板計數(shù)的臨床應(yīng)用[J]. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2012，9（26）：97-98.
[10] 徐道振. 病毒性肝炎臨床實踐[M]. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2006：68，341.
[11] 李艷. 臨床實驗室管理學(xué)[M]. 第3版. 北京：人民衛(wèi)生出版社，2012：39-66.
[12] 續(xù)惠玲. 淺析血細(xì)胞分析時血小板假性減少原因[J]. 醫(yī)學(xué)信息，2010，23（2）：224.
桐鄉(xiāng)第四人民醫(yī)院 浙江省桐鄉(xiāng)市 314051
【摘 要】目的：了解不同保存條件對血細(xì)胞分析儀檢測結(jié)果所產(chǎn)生的影響。方法：采用日本Sysmex 公司的SF-3000 全自動血細(xì)胞分析儀及配套試劑，將抽取的血液標(biāo)本按1ml/ 支的規(guī)格分別置入27 支試管并加塞蓋緊，平均分為3 組，分別置于4℃、20℃、30℃的條件下保存。以標(biāo)本在室溫（20℃）條件下放置1h 時的測定結(jié)果作為基準(zhǔn)，將其余時間點的測定結(jié)果與基準(zhǔn)值進行比較。結(jié)果：白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板參數(shù)均會受到來自保存條件和送檢時間的影響。結(jié)論：在應(yīng)用SF-3000 全自動血細(xì)胞分析儀的過程中，所使用的抗凝血標(biāo)本最佳保存溫度為4℃。若于室溫條件（20℃）下保存，應(yīng)于8h 內(nèi)完成血標(biāo)本的檢測操作。
關(guān)鍵詞 血細(xì)胞分析儀；血標(biāo)本保存條件；檢測準(zhǔn)確性
血細(xì)胞分析儀的廣泛應(yīng)用為提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性、治療方法的針對性和合理性發(fā)揮了積極的推動作用。但在實際工作中，難免會出現(xiàn)血液標(biāo)本無法及時送檢的情況，若保存不當(dāng)，勢必會對檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生負(fù)面影響。為此，本次研究圍繞不同保存條件對血細(xì)胞分析儀檢測結(jié)果的影響展開分析和討論，現(xiàn)將研究過程報告如下。
1 材料與方法
1.1 儀器與試劑
采用日本Sysmex 公司的SF-3000 全自動血細(xì)胞分析儀及配套試劑，儀器在試驗前已經(jīng)過校準(zhǔn)。
1.2 方法
1.2.1 標(biāo)本采集
抽取健康志愿者的靜脈血30ml，將其注入含有50mg EDTA-2K 的燒瓶（已硅化）混勻抗凝，即刻上機。按1ml/ 支的規(guī)格將血液分別置入27 支試管并加塞蓋緊，隨后平均分為3 組，分別置于4℃、20℃、30℃的條件下保存。在采血后的1、2、4、6、8、12、24、48、72h 這9 個時間點，分別從三組中取出一支試管進行血細(xì)胞分析。
1.2.2 分析方法
設(shè)備預(yù)熱30min 后即開始測定（保存條件為4℃的標(biāo)本取出后需在室溫下平衡10min），每支標(biāo)本進行兩次平行測定，取各參數(shù)均值打印并進行分析。每日使用質(zhì)控物對儀器進行檢測，以確保血標(biāo)本檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性不會受到來自儀器因素的影響。
1.3 評價標(biāo)準(zhǔn)
依據(jù)儀器對標(biāo)本檢測的精密度，以標(biāo)本在室溫（20℃）條件下放置1h 時的測定結(jié)果作為基準(zhǔn)，將其余時間點的測定結(jié)果與基準(zhǔn)值進行比較。以白細(xì)胞參數(shù)變化率>3%、紅細(xì)胞參數(shù)變化率>2%、血小板參數(shù)變化率>5% 為有意義。
2 結(jié)果
2.1 白細(xì)胞參數(shù)變化情況
白細(xì)胞計數(shù)（ 下簡稱WBC） 在48h（4℃）、24h（20℃）、8h（30℃）的測定值以及白細(xì)胞分類在12h（4 ℃）、8h（20℃）、4h（30℃）的測定值基本穩(wěn)定，參數(shù)變化率<3%。其余各時間點3 組血標(biāo)本的WBC 水平均表現(xiàn)出下降趨勢，在20℃、30℃的變化更點圖上，各細(xì)胞群的散點開始分散，散間分區(qū)混亂，報警增多。
淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞比例表現(xiàn)出上升趨勢，中性粒細(xì)胞比例表現(xiàn)出下降趨勢。
2.2 紅細(xì)胞參數(shù)變化情況
除始終處于穩(wěn)定狀態(tài)的血紅蛋白（下簡稱HGB）外，其余參數(shù)均受到來自溫度因素的影響。保存條件為4℃的血標(biāo)本，紅細(xì)胞值（下簡稱RBC）、紅細(xì)胞平均體積（下簡稱MCV）、紅細(xì)胞比容（下簡稱HCT）在48h 內(nèi)的測定值基本穩(wěn)定，變化率<2%。48h 后，MCV 與HCT 的測定值表現(xiàn)出輕微的上升趨勢。保存條件為20℃的血標(biāo)本，RBC（48h 內(nèi)）、MCV、HCT（12h內(nèi)）的測定值基本穩(wěn)定，變化率<2%。保存條件為30℃的血標(biāo)本，RBC（24h 內(nèi)）、MCV、HCT（8h 內(nèi)）的測定值基本穩(wěn)定，變化率2%。
MCV 在12h 后（20℃）、8h 后（30℃）的測定值呈現(xiàn)出迅速提升的趨勢，HCT 的測定值隨MCV 的升高而升高。在72h 時，RBC 在三種保存條件下的測定值均出現(xiàn)不同程度的下降，其中，30℃條件下的下降幅度最大，究其原因，可能與MCV 明顯升高、紅細(xì)胞膜發(fā)生破裂有關(guān)。
2.3 血小板參數(shù)變化情況
血小板值（ 下簡稱PLT） 在48h 內(nèi)（4℃）、24h 內(nèi)（20℃）、12h 內(nèi)（30℃）的測定值基本穩(wěn)定，血小板平均體積（下簡稱MPV）在4℃（8h 內(nèi)）、20℃（6h 內(nèi)）、30℃（4h 內(nèi)）的測定值基本穩(wěn)定，變化率<5%。其余各時間點3 組血標(biāo)本的PLT 水平均表現(xiàn)出上升趨勢，尤以20℃、30℃條件下的表現(xiàn)最為突出。與此同時，MPV 也呈現(xiàn)出快速上升的趨勢，在24h 時間點，4℃條件下的變化率為14.1%、20℃條件下的變化率為25.7%、30℃條件下的變化率為34.6%。
3 討論
本次研究的結(jié)果顯示，在應(yīng)用血細(xì)胞分析儀的過程中，所使用的抗凝血標(biāo)本最佳保存溫度為4℃。若于室溫條件（20℃）下保存，應(yīng)于8h 內(nèi)完成血標(biāo)本的檢測操作。若環(huán)境溫度≥ 30℃，應(yīng)于4h 內(nèi)完成血標(biāo)本的檢測操作。即在日常工作中，若由于某些原因限制而不能立即完成血標(biāo)本的送檢，應(yīng)盡可能將標(biāo)本放置在4℃的溫度環(huán)境下保存，如果條件不允許，則應(yīng)將其放置在20℃的溫度環(huán)境（有空調(diào)的室溫條件）下保存，以免對血細(xì)胞分析儀檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性產(chǎn)生負(fù)面影響。
需要注意的一點是，不同廠商生產(chǎn)的血細(xì)胞分析儀對于WBC的檢測原理不同，因此在實際操作的過程中，應(yīng)針對所采用的分析儀類型對最佳保存條件進行確認(rèn)，切忌生搬硬套。
參考文獻
關(guān)鍵詞：血細(xì)胞分析儀；血小板異常；血涂片染色；顯微鏡
血小板（PLT）的功能主要是促進止血和加速凝血，血小板的數(shù)量和質(zhì)量的異常會導(dǎo)致出血性疾病。血小板數(shù)量的減少常見于血小板減少性紫癜，再生障礙性貧血，脾功能亢進和白血病等有關(guān)病癥。血小板數(shù)量增加多見于常見于骨髓增生性疾病，如慢性粒細(xì)胞白血病、真性紅細(xì)胞增多癥、原發(fā)性血小板增多癥等病癥。血小板質(zhì)量異常主要見于血小板無力癥，因此對血小板數(shù)量檢測是臨床最常用的檢驗項目之一，血小板的檢測是臨床診斷和治療各種原因血小板減少癥的重要指標(biāo)。患者的血小板減少或增加可能會指導(dǎo)臨床醫(yī)師抽骨髓檢查或輸入血小板治療，因此判斷和鑒定血小板的減少或增加是極其重要和必須的。及時發(fā)現(xiàn)各種原因所引起的血小板假性減少和假性增加，有效地減少了因為診斷和治療錯誤而引起的醫(yī)療糾紛，因此如果能及時發(fā)現(xiàn)這對醫(yī)生和患者來說都尤為重要。隨著檢驗技術(shù)的發(fā)展，血細(xì)胞分析儀已基本普及，血細(xì)胞分析儀在測定血細(xì)胞方面，特別是測定血小板具有檢測方便，快捷和重復(fù)性好以及工作效率高等諸多優(yōu)點，已在各大、中醫(yī)院檢驗科的臨床檢驗工作中廣泛應(yīng)用。血小板檢查是臨床血常規(guī)檢查中的重要檢查項目，由于測定時受諸多因素影響，熟練掌握常見的測定影響因素能有效地指導(dǎo)臨床的診斷與治療。但是在實際檢測中，由于血細(xì)胞分析儀在測定血小板時常常會出現(xiàn)血小板的假性減少或增加，而且產(chǎn)生的原因復(fù)雜多變，這給操作者辨別真?zhèn)螏硪欢ɡщy，一旦辨別錯誤，容易引起醫(yī)療事故和糾紛，這應(yīng)該引起臨床廣泛注意。
1資料與方法
1.1一般資料 收集壽縣縣醫(yī)院2011年7月～2013年6月儀器測定PLT500×109/L 100例，年齡8月～45歲，其中內(nèi)科100例，兒科150例。
1.2儀器與試劑 SYSMEX-1800i全自動血細(xì)胞分析儀，雙筒顯微鏡，原裝配套試劑、質(zhì)控物，瑞氏染色液。
1.3方法
1.3.1患者靜脈采血，2ml血加入含有EDTA-K3抗凝真空管中，充分混勻，在1h內(nèi)上機完成，每份標(biāo)本測定3次，取平均值。
1.3.2對250例血小板結(jié)果異常的標(biāo)本，同時進行血涂片復(fù)檢，儀器計數(shù)相符合的標(biāo)本（片中無血小板聚集現(xiàn)象，散在分布，與涂片觀察相符）200例，其中50例為假性血小板減少和增加。
1.3.3診斷血小板假性減少的標(biāo)準(zhǔn)。當(dāng)血小板計數(shù)低于50×109/L時，多是顯著性減少，而且此時并沒有淺表皮膚及黏膜出血；顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)血小板聚集成堆，在排除標(biāo)本采集中不慎發(fā)生的凝集現(xiàn)象，這時可診斷為血小板假性減少。
1.3.4血涂片法 將血液標(biāo)本推片、染色后，油鏡下進行讀片。血涂片法血小板數(shù)（×109/L）=涂片計數(shù)血小板的數(shù)×血液細(xì)胞分析儀白細(xì)胞數(shù)（×109/L）/涂片計數(shù)血小板時所能見到白細(xì)胞數(shù)。
2結(jié)果
2.1排除了50例血小板假性增加和假性減少后，其余200例血細(xì)胞計數(shù)血小板增加或減少時與涂片法比較，符合率為（70/100）70%、（130/150）87%。
2.2 50例血小板假性增加和假性減少儀器法與血涂片法比較，見表1。
3討論
采血是否順利是造成血小板偏低的一個重要影響因素，采集手指末梢血時，因進針淺，出血慢，擠壓采血部位，使組織液滲入血液中，造成血小板減少，采集靜脈血，若采血過程不順利，血流不暢，靜脈經(jīng)多次穿刺而引起的水腫及皮下出血時，因組織損傷，導(dǎo)致組織凝血因子混入血標(biāo)本，產(chǎn)生肉眼看不見的微小凝塊，造成血小板減少，這是造成血細(xì)胞計數(shù)測定血小板結(jié)果偏低的常見的原因。因此，在閱片時應(yīng)特別注意血小板減少患者閱片，如果必要應(yīng)重新采血復(fù)查。
血液標(biāo)本放置的時間過短也能造成血小板結(jié)果偏低。在實際的工作中，在采取血液標(biāo)本后都是立即開始檢測，這時常常會出現(xiàn)血小板計數(shù)假性減少現(xiàn)象。究其原因，是因為血小板離體后，血小板的形態(tài)發(fā)生了變化，血小板外膜形成的微小管的游離端向外擴展，這使得在血小板周圍形成一些絲狀偽足，這些血小板偽足相互作用，形成了血小板可逆聚集體。這種血小板因為很難被溶血劑溶解，這使得血小板計數(shù)會暫時減少，隨著時間的慢慢推移，這種假性聚集會發(fā)生一定程度的解聚。因此，為了提高準(zhǔn)確性，建議在采血后放置15～20min再測定可得到準(zhǔn)確結(jié)果。
自動化的血液分析儀，無論是阻抗法還是光散射法，對于血小板數(shù)及形態(tài)正常的標(biāo)本，結(jié)果一般比較可靠。但是，對于血小板明顯減少或血小板形態(tài)異常者來講，用自動化的血液分析儀來分析計數(shù)誤差較大，甚至有時很難計數(shù)。主要原因是阻抗法和光散射法基本上都是按照細(xì)胞的大小來區(qū)分和計數(shù)的，但是正常人的血小板體積相差較大，而且體積分布的直方圖并不是對稱分布，而是明顯向右延伸，也就是是說存在一些大的血小板。在病理的情況下，會更多地增加一些大血小板。因為多數(shù)血液分析儀較難區(qū)分出小紅細(xì)胞與大血小板，這使得很多大血小板被認(rèn)為是紅細(xì)胞而未計入血小板總數(shù)中，這也使得血小板計數(shù)結(jié)果明顯偏低。
大量的輸入血液時會引起血小板減少。這種情況多在4～6d后恢復(fù)正常。此外，某些患者在輸血后的1w左右時間內(nèi)，會出現(xiàn)血小板計數(shù)明顯減少的現(xiàn)象。有些治療方法對血小板的計數(shù)也會產(chǎn)生較大影響，如血液經(jīng)光量子血療儀照射后，血小板計數(shù)明顯減少，經(jīng)電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，照射后的血小板形態(tài)不完整，形成大量的偽足及血小板碎片。
EDTA鹽是全自動血細(xì)胞計數(shù)儀常用的抗凝劑，它能保持細(xì)胞形態(tài)和防止血小板聚集，而有極少數(shù)人血小板在EDTA鹽抗凝后，反而使PLT聚集，EDTA （Ethylene Diamine Tetraacetic Acid）依賴性血小板減少癥（EDTA- dependent pseudo thrombocytopenia，PTCP）是因為EDTA鹽抗凝血中EDTA誘導(dǎo)血小板中的特殊蛋白使得血小板發(fā)生了凝集，而且當(dāng)在全自動血細(xì)胞計數(shù)儀上檢測時，血小板計數(shù)會發(fā)生假性減少的現(xiàn)象，血細(xì)胞分析儀不能計數(shù)凝集的血小板，因此導(dǎo)致本應(yīng)在正常計數(shù)范圍內(nèi)的血小板可能計數(shù)為20×109/L[1]。
當(dāng)標(biāo)本中血小板小于20×109/L時，儀器法可信度較差，不能很好地反映血小板的真實數(shù)量，也不能保證檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，采用血涂片間接計數(shù)血小板，可較直觀地反映患者血小板數(shù)量的多少，尤其對于血小板減少者。但是在某些情況下，假性血小板減少隱藏著真實的血小板減少或者血小板增多[2]，由于血小板生理特性，易粘附、聚集，在PLT
小紅細(xì)胞所導(dǎo)致血小板假性增高的100例血小板增高，其中30例假性增高，占30%，主要原因是當(dāng)MCV20%，血小板直方圖異常，尾部翹起，儀器顯示小紅細(xì)胞癥、紅細(xì)胞大小不均、缺鐵性等提示，但在日常臨床檢驗工作中，血小板假性增高并沒有引起重視，
綜上所述， 血細(xì)胞分析儀計數(shù)血小板具有快速、簡便、重復(fù)性好等優(yōu)點。然而，血小板易于粘附、聚集、破壞，常出現(xiàn)血小板計數(shù)假性減少現(xiàn)象，這給臨床的準(zhǔn)確診斷疾病帶來了一定的困難。造成假性血小板增加或減少的原因復(fù)雜，但在臨床中若遇到靜脈抗凝血檢查血小板顯著增加或減少而臨床檢查無體癥時，應(yīng)立即血涂片染色鏡檢查，這樣可以準(zhǔn)確測出異常血液標(biāo)本的血小板數(shù)，在某種程度上保證了異常標(biāo)本檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性，為臨床提供準(zhǔn)確可靠的診療信息，以免患者誤診、誤治。
參考文獻：
[1]邢忠海，劉東聲.EDTA依賴性血小板減少的分析與對策[J].實用醫(yī)學(xué)雜志，2011，27（3）：507-508.
[2]李盛龍，趙丹.乙二胺四乙酸鹽依賴性假性血小板減少癥研究進展[J].基層醫(yī)學(xué)論壇，2012，16（19）： 2551-2553.
【關(guān)鍵詞】嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)；全自動血細(xì)胞分析儀；計數(shù)性能 文章編號：1004-7484（2013）-12-7491-01
嗜酸性粒細(xì)胞在某些過敏性炎癥及某些寄生蟲病、傳染病和血液病時均可增高。現(xiàn)國內(nèi)大多采用外周血嗜酸性粒細(xì)胞分類計數(shù)法進行檢測，操作較費時費力。近年來，隨著全自動血細(xì)胞分析儀的應(yīng)用，使嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)的儀器化成為可能。SysmexXN-1000全自動血細(xì)胞分析儀采用半導(dǎo)體激光的流式細(xì)胞及組化染色原理進行白細(xì)胞分類計數(shù)，能將白細(xì)胞分為嗜中性、嗜酸性、嗜堿性粒細(xì)胞及單核和淋巴細(xì)胞五類。為了了解該儀器對嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性，我選擇了200份EDTA-K2抗凝靜脈全血分別用SysmexXN-1000全自動血細(xì)胞分析儀、手工分類法進行嗜酸性粒細(xì)胞計數(shù)，并將結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)處理。
1材料與方法
1.1儀器日本SysmexXN-1000全自動血細(xì)胞分析儀；日本產(chǎn)OLYMPUS顯微鏡。
1.2試劑日本東亞公司生產(chǎn)SysmexXN-1000全自動血細(xì)胞分析儀原裝進口配套試劑，EDTA-K2真空抗凝管，瑞氏―姬姆薩染液及PH6.4-6.8磷酸鹽緩沖液。
1.3標(biāo)本來源200例我院住院患者。
1.4方法采取患者靜脈標(biāo)本2ml注入EDTA-K2真空抗凝管中，在25℃室溫下3h內(nèi)檢測完畢。將經(jīng)過儀器檢測完畢的患者抗凝標(biāo)本制作成薄厚適宜的血片，依據(jù)全國臨床檢驗操作規(guī)程[1]，用瑞氏-姬姆薩染液染色后，選擇經(jīng)驗豐富、技術(shù)熟練的檢驗人員在油鏡下計數(shù)分類200個白細(xì)胞，兩種方法計數(shù)分類的嗜酸性粒細(xì)胞結(jié)果進行比較。
1.5統(tǒng)計方法使用SPSS10.0軟件進行配對t檢驗。
2結(jié)果
由于嗜酸性粒細(xì)胞在整個粒系系統(tǒng)中所占比例相對較少，因此，依據(jù)儀器分類計數(shù)結(jié)果將200例標(biāo)本分為≤2%和>2%兩個區(qū)間進行兩種方法的相關(guān)性分析，結(jié)果顯示：當(dāng)嗜酸性粒細(xì)胞≤2%時，儀器法與手工鏡檢法差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P2%時，兩種方法差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），顯示很好的相關(guān)性，相關(guān)系數(shù)r=0.959。
3討論
SysmexXN-1000全自動血細(xì)胞分析儀采用一束半導(dǎo)體激光照射標(biāo)本，并依據(jù)每個細(xì)胞產(chǎn)生的信號來相互區(qū)分。當(dāng)患者的白血胞表面物質(zhì)及內(nèi)部結(jié)構(gòu)沒有大的改變時，可以進行正確的白細(xì)胞分類，得出正確的結(jié)果[2]。XN-1000全自動血細(xì)胞分析儀的DIEF通道可將白細(xì)胞分成五類。當(dāng)嗜酸性粒細(xì)胞≤2%時，儀器法明顯高于手工鏡檢法（P
參考文獻
[1]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜，主編.全國臨床檢驗操作規(guī)程[M].南京：東南大學(xué)出版社，2006：124.
【中圖分類號】R446.11 【文獻標(biāo)識碼】 B 【文章編號】1005-0515(2010)006-063-02
PE-6300全自動血細(xì)胞的計數(shù)原理是以血細(xì)胞通過寶石微孔傳感器的過程中產(chǎn)生的阻抗變化為基礎(chǔ)的。對全血細(xì)胞20項指標(biāo)進行直接、間接測定,是血細(xì)胞三分類儀。儀器具有操作簡單,吸樣自動清洗,自動排除堵孔等功能,并具有靜脈血、末梢血和預(yù)稀釋三種模式,全自動血細(xì)胞分析儀從設(shè)計上均要求使用抗凝靜脈血來檢測,但門診上以預(yù)稀釋模式較為方便,因此本文對其中的白細(xì)胞、紅細(xì)胞、血小板計數(shù)測定結(jié)果作一分析。
1. 材料與方法
1.1 標(biāo)本來源和處理:隨機選取每天門診18-45歲患者20例,共五天100例,靜脈血模式采用EDTA.K2.2H2O作抗凝劑。末梢血的采集,按本專業(yè)末梢血采集規(guī)范進行,血液樣品在測試前均進行上下?lián)u動,轉(zhuǎn)動試管3-5分鐘進行充分混勻。
1.2 儀器與試劑:深圳市普康電子有限公司生產(chǎn)的PE-6300全自動血細(xì)胞分析儀,試劑均為配套試劑,手工試劑均按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第三版要求配劑。
1.3 方法:儀器操作嚴(yán)格按說明書操作,手工方法按《全國臨床檢驗操作規(guī)程》第三版要求操作,每份樣本測定2次,取平均值。
1.4 統(tǒng)計學(xué)方法:測定結(jié)果采用配對樣本t檢驗
2. 結(jié)果
100例標(biāo)本分別采用手工法,儀器靜脈血模式及儀器預(yù)稀釋模式,結(jié)果見表1。測定結(jié)果經(jīng)配對樣本t檢驗后,儀器靜脈血模式和手工法比較P>0.05,測定結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義。儀器預(yù)稀釋模式下紅細(xì)胞和血小板和手工法相比,P
1. 討論
PE-6300全自動血細(xì)胞分析儀血液樣本測試所得參數(shù)由三種方法得到:由儀器直接測量所得參數(shù),如WBC,RBC,PLT,HGB;根據(jù)直方圖得出的參數(shù)LYM%,MID%, GRAN%, MCV, RDW-SD, RDW-CV, MPV, PDW, P-LCR;根據(jù)公式、方法計算、推導(dǎo)所得參數(shù),LYM#,MID#,GRAN#,HCT,MCH,MCHC,PCT。血紅蛋白手工法采用氰化高鐵血紅蛋白測定法,儀器法采用血液中加入溶血素后,血紅蛋白與溶血素結(jié)合生成穩(wěn)定的類氰化高鐵血紅蛋白,都在540nm處有一個吸收峰,兩者原理一致,所以在此只對紅細(xì)胞、血小板計數(shù)做如下分析。
PE-6300全自動血細(xì)胞分析儀是以血細(xì)胞通過寶石微孔傳感器的過程中產(chǎn)生的阻抗變化為基礎(chǔ),細(xì)胞通過計數(shù)孔時在兩個電極之間的電阻隨細(xì)胞體積的增加而增加,根據(jù)歐姆定律公式U=RI,可知U隨細(xì)胞體積的增加而增加。儀器具有雙計數(shù)池,一個測量計數(shù)池和檢測電路對白細(xì)胞進行計數(shù)、分析,另一個測量計數(shù)池和檢測電路對紅細(xì)胞、血小板進行計數(shù)、分析。
在血液標(biāo)本測定中,靜脈血模式測定結(jié)果與手工方法測定結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義,而預(yù)稀釋模式測定結(jié)果中紅細(xì)胞、血小板與手工法測定結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義。通常吸樣針吸取血樣后,紅細(xì)胞和血小板在同一個計數(shù)池內(nèi)計數(shù)分析,儀器通過其預(yù)置軟件將紅細(xì)胞(82-98fl)、血小板(2-35fl)按照體積大小分群,使得正常血樣中紅細(xì)胞、血小板體積有明確的分界線,再加上該分析儀器在血小板計數(shù)中采用了先進的流體、電子、軟件處理系統(tǒng),有效地解決了在寶石微孔計數(shù)區(qū)一側(cè)部分血細(xì)胞的重復(fù)計數(shù)以及對異常樣本,如小紅細(xì)胞,破碎紅細(xì)胞,巨大血小板聚集時的分界,所以靜脈血模式測定結(jié)果與手工法測定結(jié)果差異無統(tǒng)計學(xué)意義。而應(yīng)用預(yù)稀釋模式測定,用微量吸管吸樣,可能吸入了組織液,以及稀釋液雜質(zhì)及空氣中的塵埃等諸多因素影響,再加上該儀器在測定紅細(xì)胞血小板時稀釋比例為1:32000,使得計數(shù)池稀釋倍數(shù)較靜脈血模式增加了,使得細(xì)胞直方圖上的分界線產(chǎn)生了的偏差,造成了預(yù)稀釋模式測定結(jié)果中紅細(xì)胞、血小板計數(shù)與手工法測定結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義。因此預(yù)稀釋模式在門診應(yīng)用中要做到:采血時,若血流不暢,可在傷口的遠端稍加壓,切忌在采血部位邊緣用力擠壓,避免組織液混入血液,造成測試分析結(jié)果不準(zhǔn)確;加入定量稀釋液時,要斜置一次性試管于采樣針下,使稀釋液沿管壁流下,避免產(chǎn)生氣泡:對于超出參考范圍的樣本,一定要結(jié)合臨床表現(xiàn),盡可能采用靜脈血模式,同時要對儀器提供的十二個參數(shù)特別是紅細(xì)胞、白細(xì)胞、血小板每天進行質(zhì)控,保證測定結(jié)果的準(zhǔn)確性,以滿足臨床需要。
參考文獻
【關(guān)鍵詞】Bayer ADVIA 2120;全自動血細(xì)胞分析儀;線性范圍驗證;血小板分離;多樣本
Analysis of the linear range of the platelet separated from multi-samples at Bayer ADVIA 2120
WU Shao-zhen,DENG Kun-yi,MAI Wei-xia,et al.Boai Hospital of Zhong Shan city,Zhong Shan 528403,China
【Abstract】ObjectiveTo verify the linear range of the platelets at Bayer ADVIA 2120 analyzer.MethodsAccording to ISO15189 EP6-A,platelet separated from 250 samples to verify the linear range at Bayer ADVIA 2120 analyzer.ResultsHigh concentrations of platelet can obtained from mixing multi samples.Coefficient of Variance of within-run and between-day was3.0% and 3.6%,carry-over was0.02%,platelet range at 21-4918 × 109/L Showed a linear relationship.ConclusionRegardless of blood type,high concentrations of platelet can obtained from mixing multi samples.Bayer ADVIA 2120 automated hematology analyzer has good feafures of precision,linearity,low carry-over,is a perfect performance analyzer.
【Key words】
Bayer ADVIA 2120;Full-automatic blood cell’s analyzer; The linear range ; Separation of platelets; Multi-samples
根據(jù)ISO15189醫(yī)學(xué)實驗室認(rèn)可和《醫(yī)療機構(gòu)臨床實驗室管理辦法》規(guī)定,儀器在進行臨床樣本檢測前,需進行全面的性能評價,因此我們按國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(ICSH)指南[1]從不精密度、不準(zhǔn)確度、線性范圍、攜帶污染率等幾個方面對Bayer ADVIA 2120全自動血細(xì)胞分析儀的血小板線性范圍進行了驗證,由于該儀器血小板的線性范圍為0-3500×109/L,線性范圍極寬,高濃度血小板極難收集,在線性驗證過程中困難重重,現(xiàn)介紹一種簡單易行且易于操作的方法供大家參考。
1材料和方法
1.1儀器Bayer ADVIA 2120全自動血細(xì)胞分析儀;儀器使用其配套的試劑、校準(zhǔn)品和質(zhì)控全血。
1.2樣本本院體檢中心EDTA-K2抗凝全血樣本。
1.3實驗方法
1.3.1不精密度評價
1.3.1.1批內(nèi)不精密度CV%要求不大于CLIA,88[2]要求的總誤差的1/4即6.25%;取本院體檢中心EDTA-K2抗凝全血樣本10份,每份樣本檢測2次,得到X1和χ2,用雙份檢測標(biāo)準(zhǔn)差來表示檢測反映的離散程度。
1.3.1.2天間不精密度采用配套質(zhì)控全血,連續(xù)檢測20 d,計算均值、標(biāo)準(zhǔn)差和變異系數(shù)。
1.3.2不準(zhǔn)確度評價采用ADVIA 2120與通過衛(wèi)生部臨檢中心室間質(zhì)評取得優(yōu)良成績的CD1700血液分析儀進行比對評價,比對時間為5 d,共做40份標(biāo)本,每天做8份當(dāng)天新鮮標(biāo)本,所有實驗在2 h內(nèi)完成。盡可能使50%的比對標(biāo)本不在參考區(qū)間內(nèi),各個標(biāo)本分析物含量越寬越好。各實驗結(jié)果點于X、Y座標(biāo)紙上,圖中標(biāo)出斜率為1通過零點的直線。要求r≥0.975或r2≥0.95。線性回歸統(tǒng)計Y=bX+ab代表斜率,a代表截距。根據(jù)PLT臨床使用要求,在各個臨床決定水平濃度Xc處(PLT通常以50/100/300/800)的濃度,了解Y方法引入后相對于X方法的系統(tǒng)誤差(SE)。
SE=|Yc-Xc|=|(b-1)Xc+a |
計算Xc處系統(tǒng)誤差,以系統(tǒng)誤差(SE)≤1/2 CLIA,88允許誤差即12.5%為標(biāo)準(zhǔn),以Xc處SE符合不小于3個為該檢測項目符合檢驗科準(zhǔn)確度性能要求。
1.3.3線性范圍驗證評價①取當(dāng)天新鮮體檢EDTA-K2抗凝全血標(biāo)本250份;②800轉(zhuǎn)離心7 min,吸取上層富含PLT血漿混合(約150 ml分15支膠試管)備用;③富含PLT血漿800轉(zhuǎn)離心7 min,底層RBC層棄去;吸取上層血漿混合,1500轉(zhuǎn)離心10 min,吸出上層血漿再3000轉(zhuǎn)離心10 min吸出上層血漿為L,混合底層 PLT層約3.5 ml為H;④以鞘液當(dāng)樣本檢測3次歸零,再連續(xù)H 3次、L 3次、0.1H+0.9L 2次、0.2H+0.8L 2次、0.3H+0.7L 2次、0.4H+0.6L 2次,0.5H+0.5L 2次,0.6H+0.4L 2次,0.7H+0.3L 2次,0.8H+0.2L 2次,0.9H+0.1L 2次,分別在2120上測定;⑤吸出H 5ul推成薄片,經(jīng)瑞氏染色晾干后油鏡觀察;⑥對照試驗:取體檢中心EDTA-K2抗凝O型全血樣本10份,重復(fù)②至③步驟,只留下底層約0.5 ml PLT層為H對照,在2120上測定2次,并吸出H對照5 μl推成薄片,經(jīng)瑞氏染色晾干后油鏡觀察。
1.3.4攜帶污染參考有關(guān)文獻[3]: 以鞘液當(dāng)樣本檢測3次歸零,再連續(xù)H 3次、L 3次,然后計算攜帶污染率,計算公式為:(L1-L3)/(H3-L3)×100%。
1.4統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)進行t檢驗;使用SPSS13.0統(tǒng)計分析軟件進行多項式回歸分析評價線性。
2結(jié)果
2.1精密度試驗Bayer ADVIA 2120全自動血細(xì)胞分析儀PLT批內(nèi)不精密度CV為3.0%,天間不精密度CV為3.6%,CV%均小于6.25%,符合總誤差不大于1/4CLIA,88的要求。
表1
Bayer ADVIA 2120 PLT精密度
項目1/4CLIA,88(CV%)批內(nèi)不精密度(CV%)天間不精密度(CV%)
PLT6.253.03.6
2.2不準(zhǔn)確度試驗ADVIA 2120全自動血細(xì)胞分析儀與CD1700血液分析儀進行PLT比對,r為0.981,r2為0.962,Xc處系統(tǒng)誤差符合檢驗科準(zhǔn)確度性能要求。
表2
Bayer ADVIA 2120 PLT準(zhǔn)確度
儀器T檢驗回歸方程(Y=)SE=|(b-1)Xc+a|Xc處系統(tǒng)誤差(%)符合性
21200.461Y=0.961X+3.697│(0.961-1)Xc+3.697│3.49/0.20/2.67/3.44符合
2.3線性范圍驗證評價
將濃縮的PLTH值、L值稀釋成11個濃度后,將檢測結(jié)果與預(yù)期值(見表3),用EP6-A[4]法的多項式回歸分析評價線性(見表4)。ADVIA 2120 全自動血細(xì)胞分析儀PLT在21~4918×109/L范圍內(nèi)呈一項次線性關(guān)系。
表3
Bayer ADVIA 2120 PLT線性驗證測定表
標(biāo)本號1234567891011
測量值120568114416882256284333373850443049255428
測量值221577114716142237278033183837436549105431
均值21573114616522247281233283844439849185430
預(yù)期值21562110216432185272632663870434848895430
表4
Bayer ADVIA 2120 PLT多項式回歸分析評價線性分析結(jié)果
階別系數(shù)數(shù)值系統(tǒng)誤差t檢驗回歸標(biāo)準(zhǔn)誤自由度
1st b1549.2333.363163.34026.04620
2ndb2-2.5061.234-2.03121.65519
3rdb2-1.7999.515-0.189
3rdb3-0.0470.628-0.07523.70918
2.4對照試驗H管涂片鏡下見WBC、RBC偶見,PLT極為多見,單個散在分布,結(jié)構(gòu)基本完整,形態(tài)基本正常,片尾見少量PLT聚集,形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常,與儀器檢測顯示W(wǎng)BC:1.5×109/L;RBC:0.27×1012/L;PLT:5430×109/L和警告提示PLT聚集“1+”相符;H對照管涂片鏡下見WBC、RBC偶見,PLT極多見,單個散在分布,結(jié)構(gòu)基本完整,形態(tài)基本正常,片尾見少量PLT聚集,形態(tài)結(jié)構(gòu)基本正常,與儀器檢測顯示W(wǎng)BC:1.2×109/L;RBC:0.21×1012/L;PLT:1150×109/L和警告提示PLT聚集“1+”相符。此試驗證明血型不合對提取分離PLT無直接影響。
2.5攜帶污染結(jié)果PLT攜帶污染結(jié)果為0.02%,符合儀器顯示
3討論
通過對Bayer ADVIA 2120全自動血細(xì)胞分析儀PLT的線性范圍驗證評價,得出其檢測血小板的批內(nèi)和天間不精密度分別為3.0%和3.6%,攜帶污染率為0.02%,與吳新忠等人報道的基本相符[3],符合ICSH標(biāo)準(zhǔn)和ISO15189的要求;線性范圍寬,超出儀器說明書申明的線性范圍,在21~4918×109/L范圍內(nèi)仍呈良好線性關(guān)系。
任意混合多樣本分離、濃縮PLT成功的原因分析為:
3.1因PLT表面具有復(fù)雜的血型抗原,由遺傳因素決定,可分為血小板非特異性抗原和血小板特異性抗原;非特異性特原與紅細(xì)胞血型、HLA血型的抗原有關(guān);特異性抗原由血小板特有的抗原簇組成,表現(xiàn)出血小板獨特的遺傳多態(tài)性,其抗原存在于PLT表面;正常健康人血小板抗體為陰性,因此ABO血型不合的多樣本混合富含PLT的血漿中只有PLT抗原而無抗體,因此即可排除PLT因抗原抗體反應(yīng)而發(fā)生凝集。
3.2因血液中的WBC存在大量的WBC抗原,而正常健康人血液中不含WBC抗體,如此也可排除WBC因抗原抗體反應(yīng)發(fā)生凝集而干擾PLT的檢測。
3.3在實驗中經(jīng)過步驟1.3.3中②即800轉(zhuǎn)離心7 min和1.3.3中③的操作即含PLT血漿800轉(zhuǎn)離心7 min,底層RBC層棄去后,血漿中只存在極少量的RBC和WBC,其抗原比例很少,而即使血漿中含有大量的抗ABO抗體,也達不到抗原抗體反應(yīng)的最適比,因此也可排除RBC因抗原抗體反應(yīng)發(fā)生凝集而干擾PLT的檢測。
因此多樣本任意混合富含PLT的血漿,可基本排除WBC、RBC和PLT凝集產(chǎn)生的干擾。H管和H對照管儀器均警告提示PLT聚集“1+”,與涂片片尾有少量PLT聚集相符;分析其原因與PLT的生理特性粘附、聚集、釋放、收縮和高濃度相關(guān),少量PLT聚集并沒有對PLT檢測造成大的干擾,觀察聚集的PLT形態(tài)結(jié)構(gòu)基本完整,分析其聚集屬于第一時相的可逆聚集時相,對儀器PLT的檢測影響較少,儀器僅顯示PLT聚集“1+”。因此分離、濃縮PLT時采用多樣本任意混合可收集到高濃度的PLT。
參考文獻
[1]International Council for Standardization in Hematology.Guidelines for the evaluation of blood cell analyzerincluding those used for the differential leucocyteand reticulocyte counting and cell marker application.Prepared by the ICSH expert panal on cytometry.Clin Lab Haemat,1994,16:157-174.
[2]Department of Health and Human Services.Centersfor Medicare &Medicaid Services.
[3]吳新忠,龐鑫,羅福東,等.Bayer ADVIA 2120全自動血細(xì)胞分析儀的性能評價.現(xiàn)代醫(yī)學(xué)儀器與應(yīng)用,2007,19(6):62-64.
【關(guān)鍵詞】血液； 血細(xì)胞計數(shù)；校準(zhǔn)
【中圖分類號】R331【文獻標(biāo)識碼】A【文章編號】1004-4949（2013）12-152-02
引言：目前血細(xì)胞分析儀在各檢驗科的血常規(guī)測定中已非常普及，它大大地提高了血細(xì)胞分析的效率。但由于儀器的種類繁多，性能差異較大，而且各種儀器的工作原理也不完全相同，完成一個項目測定要受到儀器、試劑、校準(zhǔn)品、操作程序以及操作人員等因素影響。因此，如何避免不同儀器之間測定結(jié)果的差異，如何提高測定結(jié)果的準(zhǔn)確性，全面做好血液分析儀的質(zhì)量控制是一項非常重要的工作。
1材料與方法
1.1材料： （1）儀器和試劑：深圳邁瑞5800全自動血細(xì)胞分析儀及配套試劑，法國ABX―60半自動血細(xì)胞分析儀及配套試劑。（2）校準(zhǔn)物及質(zhì)控物：ABX-60血細(xì)胞分析儀的配套校準(zhǔn)物及定值質(zhì)控（邁瑞公司生產(chǎn)，批號zxll209c，效期：20090916）。（3）EDTA―K2真空抗凝管（山東威海生產(chǎn)，批號20090720，效期201107）。
1.2方法：儀器校準(zhǔn)：用校準(zhǔn)參考儀器拜耳2120血細(xì)胞分析儀之進口原裝配套校準(zhǔn)品對其進行校準(zhǔn)，再在該儀器上將健康人新鮮抗凝全血連續(xù)測定11次，棄去第1次結(jié)果，計算其余10次各指標(biāo)之均值作為新鮮血參考定值。用此定值新鮮血代替校準(zhǔn)品對邁瑞5800及拜耳2120兩臺血細(xì)胞分析儀進行校準(zhǔn)（樣本采集到校準(zhǔn)完成4小時內(nèi)結(jié)束）。
比對試驗：選取臨床患者高、中、低值5份新鮮抗凝全血在上述校準(zhǔn)后的各臺儀器上與其他樣本一同測定（測平行樣取均值）。以拜耳2120血細(xì)胞分析儀所測結(jié)果為標(biāo)準(zhǔn)，分別計算邁瑞5800及ABX-60兩臺血細(xì)胞分析儀所測結(jié)果之偏差（CV%）。
2統(tǒng)計學(xué)分析
計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用成組t檢驗，計數(shù)資料采用卡方檢驗以及Ridit檢驗。應(yīng)用SPSS10.0統(tǒng)計軟件包處理，P
3結(jié)果
兩臺血細(xì)胞分析儀校準(zhǔn)前的重復(fù)性測定CV%（均在全血模式下進行）見表1，從表1可以看出，儀器重復(fù)性很好，符合校準(zhǔn)條件。
4討論
血細(xì)胞分析是臨床最常用的實驗室檢測指標(biāo)，其結(jié)果的準(zhǔn)確與否直接影響到多種疾病的診療。全自動血細(xì)胞分析儀由于計數(shù)準(zhǔn)確，精密度高，操作簡便、快速，因而發(fā)展迅速，已逐漸取代傳統(tǒng)手工方法，成為臨床實驗室的主要檢測手段。但由于生產(chǎn)血細(xì)胞分析儀的廠家多，各自使用的測定原理和方法不盡相同，導(dǎo)致其測定結(jié)果及參考范圍有所差異。國內(nèi)各醫(yī)院使用不同廠家和型號的血細(xì)胞分析儀已成為普遍現(xiàn)象，致使分析結(jié)果呈現(xiàn)不同程度的差異，給臨床跟蹤觀察與對比帶來困難。
新儀器在安裝調(diào)試之后用于臨床測定之前，首先要對新儀器各項性能指標(biāo)進行初步評估。即按照國際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會（ICSH）和美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)化研究所（CLSI）的有關(guān)規(guī)定，對儀器的各項性能指標(biāo)進行評估，包括儀器的線性范圍、精密度、準(zhǔn)確度、抗干擾性、白細(xì)胞分類以及攜帶污染率等。有條件的應(yīng)與其他性能穩(wěn)定、運行良好、結(jié)果具有可溯源性的儀器進行比對。這樣就能對新儀器的各項性能指標(biāo)的實際情況有一個較全面的了解。
血細(xì)胞分析儀的校準(zhǔn)直接影響到檢測結(jié)果的正確性。可以采取相應(yīng)的校準(zhǔn)方式：（1）應(yīng)選用儀器商提供的配套血細(xì)胞校準(zhǔn)品進行校準(zhǔn)，這是最理想和最實用的方法，但這種原裝校準(zhǔn)品價格比較昂貴且有效期短，不易普及；（2）用新鮮的全血標(biāo)本進行校準(zhǔn)，即用新鮮血液標(biāo)本在其他已確定用配套校準(zhǔn)品校準(zhǔn)好且性能穩(wěn)定的血細(xì)胞分析儀上進行測定，測定多次取均值，將測定的結(jié)果視為該標(biāo)本的標(biāo)準(zhǔn)值，來校準(zhǔn)需要校準(zhǔn)的儀器，這樣也會得到比較滿意的結(jié)果，也可以用這種方式來校準(zhǔn)同一實驗室內(nèi)不同血細(xì)胞分析儀，確保本實驗室不同血細(xì)胞分析儀測定結(jié)果的一致性。
不同廠家、不同型號的血細(xì)胞分析儀對試劑的要求都不完全相同，由于目前試劑的種類繁多，有進口配套的、國產(chǎn)的以及各實驗室自制的等等。不同的試劑，即使試劑的配方相同，其內(nèi)在的一些參數(shù)也不完全相同，主要包括試劑的pH值、電導(dǎo)率、滲透壓和離子強度等。而血細(xì)胞分析儀對以上參數(shù)的細(xì)微變化都非常敏感，尤其在白細(xì)胞分類別敏感。因此，我們建議最好使用儀器配套原裝試劑，保證儀器測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
參考文獻
[1]葉應(yīng)嫵，王毓三，申子瑜，等.全國臨床檢驗操作規(guī)程.南京：東南出版社，2006：47-81
達州市婦幼保健院檢驗科，四川達州 635000
[摘要] 目的 分析全血細(xì)胞分析以及白細(xì)胞分類中復(fù)檢規(guī)則的制定情況。方法 選取不同科室的1400份血樣本，均分別采用xs-1000i型全自動血球分析儀檢測，同時進行鏡檢，以鏡檢結(jié)果作為診斷結(jié)果參照標(biāo)準(zhǔn)，制定暫行復(fù)檢規(guī)則，并應(yīng)用于全血細(xì)胞分析以及白細(xì)胞分類中，同時根據(jù)復(fù)檢情況制定出更具可行性的復(fù)檢規(guī)則。結(jié)果 現(xiàn)行復(fù)檢規(guī)則的復(fù)檢率為25.3%（暫定復(fù)檢規(guī)則復(fù)檢率為31.2%），復(fù)檢率明顯降低，提高了臨床對血細(xì)胞的檢測效率。結(jié)論 本文所制定的復(fù)檢規(guī)則臨床應(yīng)用價值明顯提高，但今后還需在實踐中進一步作調(diào)整。
[
關(guān)鍵詞 ] 白細(xì)胞分類；全血細(xì)胞分析；復(fù)檢規(guī)則
[中圖分類號] R733 [文獻標(biāo)識碼] A [文章編號] 1672-5654（2014）05（b）-0022-03
血細(xì)胞分析儀在當(dāng)前臨床多種疾病診斷中有重要的應(yīng)用價值，但因僅采用血細(xì)胞分析儀存在一定的異常病理標(biāo)本的誤漏診現(xiàn)象，需要進一步行復(fù)檢工作，以保證檢驗結(jié)果的準(zhǔn)確性[1-2]。本文即對我院實驗室在全血細(xì)胞分析以及白細(xì)胞分類中的復(fù)檢規(guī)則作具體探析，以為臨床在血細(xì)胞分析中合理制定復(fù)檢規(guī)則提供參考。現(xiàn)匯報如下。
1資料與方法
1.1一般資料
1.1.1標(biāo)本來源 從2010年7月—2013年7月我院新生科、普兒科以及婦科、產(chǎn)科等科室收集1400例患者的血樣本，患者年齡均在0個月~68歲，平均（31.7±8.3）歲；其中，住院血樣本637分，門診血樣本763份；1131例為初診樣本，269例為復(fù)診樣本。
1.1.2試劑與儀器 均使用xs-1000i型血球分析儀以及相配套的原裝試劑、質(zhì)控和校準(zhǔn)物；同時，使用奧林巴斯生產(chǎn)的雙筒顯微鏡進行顯微鏡檢，染色采用瑞-姬染液，真空抗凝管使用EDTA K2型（成都瑞綺）。
1.2方法
1.2.1儀器檢測方法 分別采集靜脈血液2 mL，注入真空抗凝管中，并于2h內(nèi)完成所有樣本的檢測。檢測中按照儀器操作說明，并嚴(yán)格在規(guī)范的質(zhì)控條件下完成。
1.2.2鏡檢方法 將所有樣本均進行血涂片測定，均推血涂片2張，且每張WBC計數(shù)均為100個，采用瑞-姬染色，分類計數(shù)均由2名主管醫(yī)師（工作經(jīng)驗均在10年以上）分別完成，并取2人所得結(jié)果的均值作為實驗室檢測結(jié)果[3]。
1.3暫定復(fù)檢規(guī)則制定方法與評估方式
1.3.1制定方法 對血球分析儀檢測后生成的初檢實驗結(jié)果進行統(tǒng)計，并結(jié)合我院特色以及科室臨床實踐情況等，同時參考“國際范圍41條規(guī)則” [4]，暫時制定出復(fù)檢規(guī)則。具體情況見表1。
1.3.2評估方式 所有樣本均同時行鏡檢后統(tǒng)計相應(yīng)結(jié)果，并作為診斷的金標(biāo)準(zhǔn)，同時，以金標(biāo)準(zhǔn)為參照，對暫定出的復(fù)檢規(guī)則作合理評估。評價結(jié)果包括：a.真陰性—診斷結(jié)果與暫定規(guī)則相一致，且鏡檢結(jié)果提示為陰性；真陽性—診斷結(jié)果與暫定規(guī)則相沖突，且鏡檢結(jié)果提示為陽性；假陰性—診斷結(jié)果與暫定規(guī)則相一致，但鏡檢結(jié)果提示為陽性；假陽性—診斷結(jié)果與暫定規(guī)則相沖突，但鏡檢結(jié)果提示為陰性[5-6]。
1.4分析指標(biāo)
①對全血細(xì)胞參照暫定復(fù)檢規(guī)則的假陽性率，以及白細(xì)胞參照暫定復(fù)檢規(guī)則的分類情況分別作統(tǒng)計分析；②對復(fù)檢規(guī)則的制定情況統(tǒng)計。
1.5統(tǒng)計學(xué)分析
用spss 16.0軟件對以上相關(guān)數(shù)據(jù)作處理分析，χ2檢測計數(shù)數(shù)據(jù)，多因素對比用Logstic回歸法分析，P＜0.05為對比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。
2結(jié)果
2.1全血細(xì)胞參照暫定復(fù)檢規(guī)則的假陽性率
檢測結(jié)果統(tǒng)計顯示，規(guī)則1、10、二項規(guī)則在檢測中未見同種情況，其余規(guī)則中，規(guī)則15、16、17、18、出現(xiàn)假陽性率相對較高，均在2.0%以上，以規(guī)則17假陽性率最高（6.86%，P＜0.05）。詳見表2。
2.2白細(xì)胞參照暫定復(fù)檢規(guī)則的分類情況
參照暫定復(fù)檢規(guī)則進行白細(xì)胞分類后顯示，嗜酸粒細(xì)胞高于1%的異常情況出現(xiàn)率（2.21%）最高（P＜0.05）；中性粒細(xì)胞高于80%以及淋巴細(xì)胞低于20%兩種異常情況的出現(xiàn)率（分別為1.57%和1.07%）相對于其他情況更高（P＜0.05）。見表3。
2.3復(fù)檢規(guī)則制定情況
根據(jù)暫定復(fù)檢規(guī)則在全血細(xì)胞分析以及白細(xì)胞分類中的應(yīng)用情況，同時本院特色以及科室臨床實踐經(jīng)驗等，并經(jīng)專業(yè)醫(yī)師研討后制定出可行性更高的復(fù)檢規(guī)則。見表4。
3討論
血細(xì)胞分析儀在多種血液疾病的診斷中有重要的應(yīng)用價值，對提高診斷效率以及準(zhǔn)確率，為患者爭取寶貴治療時間有積極意義，但同時，采用血細(xì)胞分析儀在進行全血細(xì)胞分析以及白細(xì)胞分類時，因存在一定的假陽性，容易導(dǎo)致臨床出現(xiàn)誤診；通過制定合理的復(fù)檢規(guī)則，提高全血細(xì)胞儀的應(yīng)用價值，減少復(fù)檢工作量，并提高診斷準(zhǔn)確度[7-8]。
本文以我院采用xs-1000i型血球分析儀進行全血細(xì)胞分析以及白細(xì)胞分類情況為例，對復(fù)檢規(guī)則的合理制定作了探析。結(jié)果顯示，在全血細(xì)胞分析中，規(guī)則15、16、17、18出現(xiàn)假陽性率相對較高，均在2.0%以上，以規(guī)則17假陽性率最高（6.86%，P＜0.05）；進行白細(xì)胞分類情況顯示：嗜酸粒細(xì)胞高于1%情況出現(xiàn)率（2.21%）最高（P＜0.05）；中性粒細(xì)胞高于80%及淋巴細(xì)胞低于20%出現(xiàn)率（分別為1.57%和1.07%）相對更高（P＜0.05）。
規(guī)則17中異常淋巴細(xì)胞或不典型細(xì)胞以及規(guī)則15中核左側(cè)移動或幼稚粒細(xì)胞出現(xiàn)假陽性率較高，考慮多數(shù)因細(xì)胞的分布出現(xiàn)異常而致檢測結(jié)果呈現(xiàn)為假陽性；考慮因xs-1000i型血球分析儀計數(shù)血小板和參考方法間存在較明顯的相關(guān)性；規(guī)則18中PLT聚集考慮與采血過程中存在不規(guī)范操作等有關(guān)。在考慮以上出現(xiàn)假陽性偏高相關(guān)因素，同時結(jié)合白細(xì)胞分類中假陽性率偏高的情況，對暫定的附件規(guī)則作相應(yīng)的調(diào)整，并制定出我院現(xiàn)行使用的復(fù)檢規(guī)則（本文表4）。將現(xiàn)行的復(fù)檢規(guī)則應(yīng)用于臨床進行全血細(xì)胞分析以及白細(xì)胞的分類實踐并作相關(guān)統(tǒng)計后顯示，現(xiàn)行復(fù)檢規(guī)則的復(fù)檢率為25.3%（暫定復(fù)檢規(guī)則復(fù)檢率為31.2%），復(fù)檢率明顯降低，明顯提高了臨床對血細(xì)胞的檢測效率。
綜上可知，在全血細(xì)胞分析以及白細(xì)胞分類中制定合理的復(fù)檢規(guī)則，對提高血細(xì)胞的檢測效果有積極意義。
[
參考文獻]
[1] 陳暉.自動血細(xì)胞分析后血涂片復(fù)檢規(guī)則的評估[J].中華全科醫(yī)學(xué)，2010,8(8):276-278.
[2] 李春碧.BC-5800全血細(xì)胞分析儀細(xì)胞復(fù)檢規(guī)則的制定[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2013,10(4)：478-479.
[3] 楊達山.對51例全血細(xì)胞分析檢查結(jié)果的回顧性分析[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué),2011,17(27)：110-111.
[4] 夏天,吳華軍,田俊華.XE-2100血細(xì)胞分析儀白細(xì)胞報警功能的可信度分析[J].浙江醫(yī)學(xué),2011,33(2)：242-243.
[5] 何春燕,張蕾,汪嘉，等.對全自動血液分析儀白細(xì)胞計數(shù)范圍復(fù)檢規(guī)則的確立與驗證[J].檢驗醫(yī)學(xué),2011,26(7):461-465.
[6] 陳明,任東平,馮雪敏，等.國產(chǎn)五分類全自動血細(xì)胞分析儀顯微鏡復(fù)檢標(biāo)準(zhǔn)的制定和應(yīng)用[J].檢驗醫(yī)學(xué)與臨床,2009,6(7)：126-128.
[7] 朱建洲,林廣民,王俊紅，等.LH750血細(xì)胞分析儀復(fù)檢規(guī)則制定及應(yīng)用評價[J].中國誤診學(xué)雜志,2012,12(18):62-63.
關(guān)鍵詞 外周血細(xì)胞 形態(tài)學(xué)檢查 重要性
隨著科學(xué)的發(fā)展各種自動化儀器的不斷的運用于日常的檢驗工作血液檢驗進入了新階段幫助檢驗者簡化了許多繁瑣的操作步驟節(jié)省了大量的人力物力提高了檢驗速度提高了工作效率。然而隨著血液分析儀的普及忽視了傳統(tǒng)的顯微鏡對血常規(guī)檢查的形態(tài)學(xué)檢查以至體液中的紅、白細(xì)胞也辨認(rèn)不清;瘧原蟲漏檢時有發(fā)生報告中見不到紅、白細(xì)胞形態(tài)學(xué)的描述連中性粒細(xì)胞毒性病變也從報告單中絕跡漏檢、漏診、誤診的現(xiàn)象屢有發(fā)生。應(yīng)當(dāng)加強對檢驗人員的定期培訓(xùn)制定相對應(yīng)的措施減少此類事件的發(fā)生避免漏診誤診減少病人的支出縮短病人就診時間以免影響患者診斷和延長治療時間。
筆者從事基層臨床檢驗工作近年一直十分重視臨床檢驗工作中標(biāo)本的顯微鏡的形態(tài)學(xué)檢查走訪了許多鄉(xiāng)鎮(zhèn)衛(wèi)生院的實驗室發(fā)現(xiàn)血細(xì)胞分析儀和尿液分析的結(jié)果已完全代替了傳統(tǒng)的檢驗顯微鏡已成檢驗室里的一個擺設(shè)了。筆者從自己工作的檢驗室對人次的外周血標(biāo)本在用血細(xì)胞分析儀對外周血血細(xì)胞分析的同時進行傳統(tǒng)的顯微鏡檢查二者對照完全穩(wěn)合者不到%其原因分析如下。
血細(xì)胞分析儀本身對白細(xì)胞的分類就是不準(zhǔn)確的
依據(jù)血液分析儀將外周血細(xì)胞化分為三群:淋巴細(xì)胞;中間細(xì)胞MID指細(xì)胞體積在9-16fl之間的中間細(xì)胞區(qū)主要包括單核細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞核左移的各階段幼稚細(xì)胞或白血病時白血細(xì)胞。第三群是大細(xì)胞區(qū)主要是中性粒細(xì)胞GRAN。血細(xì)胞分析儀對白細(xì)胞的分類本身就是不準(zhǔn)確的產(chǎn)生這種結(jié)果的原因是這種分析儀工作原理的缺陷。這種分析儀其原理是電阻抗法――即將外周血按一定比例稀釋后送到儀器的檢測單元檢測單元微孔的兩側(cè)有一對正負(fù)電極連接恒流電源。由于血細(xì)胞屬不良導(dǎo)體稀釋液中的細(xì)胞在恒定負(fù)壓作用下一個個通過微孔時電極間的電阻突然增加形成電流的變化從而在儀器產(chǎn)生一個個的脈沖信號脈沖變化的次數(shù)與通過微孔的細(xì)胞數(shù)一致而脈沖的幅度與細(xì)胞的體積成正比。儀器根據(jù)各群占總體的比例計算出各群的百分率如果與該標(biāo)本的白細(xì)胞總數(shù)相乘即得到各類細(xì)胞的絕對值。可以看出儀器電阻法只是根據(jù)細(xì)胞體積的大小將白細(xì)胞分成幾個群體。如果將以手工顯微鏡法分類補償可以使結(jié)果可靠。
無法識別外周血液中血常規(guī)被破壞
外周血液中的白細(xì)胞在正常狀況下骨髓按一定的規(guī)律將成熟的白細(xì)胞釋放入外周血而在許多病理因素的作用下這種規(guī)律被破壞。如在急性感染時由于機體抗感染需要骨髓釋放大量的白細(xì)胞入外周血使外周血中出現(xiàn)較幼稚的白細(xì)胞此時較幼稚白細(xì)胞的體積將與外周某正常的體積形成交叉;又如在血液系統(tǒng)疾病時如各種急慢性白血病及各種原因引起的嚴(yán)重貧血外周都會有不同程度的異常細(xì)胞在這種情況下無論是三分群還是五分類的血細(xì)胞分析儀均不能準(zhǔn)確的進行分類;在嚴(yán)重貧血的病人外周血液中會出現(xiàn)有核的紅細(xì)胞這些有核紅細(xì)胞也會當(dāng)作白細(xì)胞而計數(shù)
從而影響血細(xì)胞分析儀計數(shù)的準(zhǔn)確性。
無法識別中性粒細(xì)胞的核左移和細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化
在急性感染時外周血中中性粒細(xì)胞顯著增多時出現(xiàn)明顯的核左移并出現(xiàn)體積大小不均這都使血細(xì)胞計數(shù)儀不能進行準(zhǔn)確的計數(shù)和分類。另外血細(xì)胞分析儀不能識別外周血的結(jié)構(gòu)變化如紅系的Howell-Jolly小體、Cabot環(huán)、點彩紅細(xì)胞及有核紅細(xì)胞等;粒系的中毒顆粒、空泡變性、杜勒體、核變性等淋巴系中的異常淋巴、淋巴細(xì)胞的衛(wèi)星核等。血細(xì)胞分析儀均不能識別。
只能粗糙的對血細(xì)胞進行分類
血細(xì)胞分析儀本身尤其是三分群的血細(xì)胞分析儀都只能粗糙的對血細(xì)胞進行分類它的中間細(xì)胞群包括正常的嗜酸性粒細(xì)胞、嗜堿性粒細(xì)胞、單核細(xì)胞以及在病理狀態(tài)下異常細(xì)胞。如利用Coulter JT-IR血細(xì)胞分析儀檢測外周血液只能將白細(xì)胞分為淋巴細(xì)胞百分率GR、單核細(xì)胞百分率Y、粒細(xì)胞百分率MO三個群對嗜酸粒細(xì)胞EO則不能很好地區(qū)分產(chǎn)生這種結(jié)果的原因是這種分析儀工作原理的缺陷。
無法識別血小板體積差
眾所周知血小板體積差異大大的和巨大血小板在體積上與小紅細(xì)胞相差不大這也使血細(xì)胞難以準(zhǔn)確對其進行計數(shù)。另外血小板在體積上的差異也反映在功能上臨床上許多病人有明顯的出血體征但血小板計數(shù)在正常范圍此時作為檢驗者應(yīng)當(dāng)進行血涂片做常規(guī)染色檢查在涂片上觀察血小板有無大小不均有無巨大血小板和小血小板以及血小板形態(tài)有無改變胞質(zhì)的染色性顆粒的有無多少粗細(xì)等以及血小板的在涂片上的分布情況是成群、成堆或成片集聚一起還是散在分布。
其他因素
某些血液寄生蟲及惡性腫瘤的骨髓轉(zhuǎn)移都必須進行形態(tài)學(xué)的檢驗才能加以識別從而做出正確的診斷。傳統(tǒng)手工計數(shù)和分類準(zhǔn)確性也受許多因素的影響。取決于操作者的技術(shù)水平、責(zé)任心以及是否遵循醫(yī)學(xué)檢驗的操作規(guī)程等。
